草苷 和其代谢物AMPA的测定,达到并超过环境保护署(EPA)547方法要求的准确度与灵敏度。草苷 是一种广谱 。它广泛用于农业,所以存在于饮用水中。一种灵敏的分析方法被开发用来分析草苷 和其基本代谢物甲氨 的水平。泰特的柱后衍生方法也可以对植物和土壤中的草苷 和甲氨 进行测定。利用简单的提取过程,然后利用阳离子交换柱芯进行清除,改进了蔬菜样品的制备过程。背景草苷 和甲氨 被强离子交换柱分离。(完全磺酸化,交联的聚苯乙烯,K+/H+混合模式)。等度分离之后,分析柱被KOH溶液再生,然后用洗脱液进行再平衡。通过两步柱后衍生反应实现荧光检测。第一步,将草苷 被次氯酸盐氧化为氨基乙酸。第二步,氨基乙酸与邻苯二醛和ThiofluorTM(一种pH9-10的硫醇)产生高荧光的异吲哚。AMPA不需要第一步的氧化过程便可与OPA试剂反应(如图);过氧化会使它产生的荧光减弱。基本的样品配制下面是蔬菜和水样品中含有的草苷 的基本样品制备过程。蔬菜的测定方法与AOAC的测定过程不同。我们开发了离子交换柱芯,省略了许多繁琐的提取过程,提高了提取的重复性。该柱芯经过本实验室可靠的认证。蔬菜样品分析提取:取去除水分的25g匀质样品,加水至125ml。高速搅拌3-5分钟,然后离心10分钟。将20ml水性提取液转移至离心管中,加15ml 以形成非极性共聚物,振摇2-3分钟,离心10分钟。转移4.5mL上清液至离心管中,加入0.50mL酸性改性剂(16gKH2PO4,160mLH2O,40mL ,13.4mLHCl),振摇后离心10分钟。根据基质调整方法:蔬菜含大量1)水2)蛋白质3)脂肪1)因为玉米中含有大量的水,将检测样品量降至12.5g2)含有大量蛋白质时加入100μLHCl至20mL的粗提物中,振摇离心10min。3)脂肪含量高的玉米,进行两次二 提取。阳离子交换提取:转移1mL前提取物(含0.18g玉米或0.09干燥过的玉米)至交换柱中。用0.7mL洗提液(160mLH2O,2.7mLHCl,40mL )洗脱,弃去洗脱液,重复两次。然后用12mL洗提液用圆底烧瓶收集。使用旋转蒸发仪至水浴中恒温40℃蒸发至干燥,或收集于离心管中使用真空旋转蒸发仪。用2.0mL洗提液溶解滤渣(1.5mL对干躁的玉米)。提取物在蒸发前可在冰箱中保存7天。水样分析用0.45μm的滤膜过滤,进样200-400μL如果草苷 出现分叉峰,在样品瓶中直接滴2滴Restore溶液。柱后衍生条件草苷 分析使用1954150分析柱和1953020保护柱柱温:55℃HPLC流速:0.4mL/minHPLC程序